單核細(xì)胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes），簡(jiǎn)稱單增李斯特菌，是一種革蘭氏陽(yáng)性小桿菌，大小為0.4-0.5μm×0.5-2μm，直或稍彎。多數(shù)菌體一端較粗，似棒狀，常呈V字形排列，有的呈絲狀，偶見雙球狀。在22℃-25℃環(huán)境中，可形成4根鞭毛。單增李斯特菌對(duì)物理化學(xué)因素抵抗力較強(qiáng)，能在土壤、糞便、青貯飼料、干草等環(huán)境中長(zhǎng)期存活。對(duì)堿和鹽具有較強(qiáng)抵抗力，對(duì)青霉素、氨芐[biàn]青霉、四環(huán)素、磺胺等藥物均敏感。本菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，兼性厭氧，能在4℃-45℃環(huán)境中生長(zhǎng)，最適生長(zhǎng)溫度為30℃-37℃。單增李斯特菌是一種人畜共患病的病原菌，能引起人畜李氏菌病。感染后，主要表現(xiàn)為敗血癥、腦膜炎及單核細(xì)胞增多。由于本菌為細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主對(duì)其的清除主要依賴細(xì)胞免疫功能。因此，李姓桿菌病多發(fā)于新生兒、老人以及免疫功能低下者。單核細(xì)胞增生李氏菌主要通過糞一口途徑感染，也可通過眼及破損皮膚、黏膜進(jìn)入人體造成感染。該菌廣泛存在于自然界中，食品中的單增李斯特菌對(duì)人類安全具有危險(xiǎn)，因?yàn)樵?℃環(huán)境中仍可生長(zhǎng)繁殖，成為冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。因此，食品衛(wèi)生微生物檢驗(yàn)中必須重視對(duì)單增李斯特菌的檢測(cè)。
生物學(xué)特性
形態(tài)與染色
該菌為革蘭氏陽(yáng)性短桿菌，大小約為0.5μmх1.0-2.0μm,直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀，兼性厭氧、無(wú)芽孢，一般不形成莢膜，但在營(yíng)養(yǎng)豐富的環(huán)境中可形成莢膜，在陳舊培養(yǎng)中的菌體可呈絲狀及革蘭氏陰性，該菌有4根周毛和1根端毛，但周毛易脫落。
培養(yǎng)特性
該菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在20-25℃培養(yǎng)有動(dòng)力。穿刺培養(yǎng)2-5天可見倒立傘狀生長(zhǎng)，肉湯培養(yǎng)物在顯微鏡下可見翻跟斗運(yùn)動(dòng)。該菌的生長(zhǎng)范圍為2-42℃（也有報(bào)道在0℃能緩慢生長(zhǎng)），最適培養(yǎng)溫度為35--37℃，在pH中性至弱堿性（pH9.6）、氧分壓略低、二氧化碳張力略高的條件下該菌生長(zhǎng)良好，在磷化氫8-4.4能緩慢生長(zhǎng)，在6.5%NaCl肉湯中生長(zhǎng)良好。在固體培養(yǎng)基上，菌落初始很小，透明，邊緣整齊，呈露滴狀，但隨著菌落的增大，變得不透明。在5-7%的血平板上，菌落通常也不大，灰白色，刺種血平板培養(yǎng)后可產(chǎn)生窄小的β-溶血環(huán)。在0.6%酵母浸膏胰酪大豆瓊脂(TSAYE)和改良McBride(MMA)瓊脂上，用45角入射光照射菌落，通過解剖鏡垂直觀察，菌落呈藍(lán)色、灰色或蘭灰色。
生化反應(yīng)
該菌觸酶陽(yáng)性，氧化酶陰性，能發(fā)酵多種糖類，產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，如發(fā)酵葡萄糖、乳糖、水楊素、麥芽糖、鼠李糖、七葉苷、蔗糖（遲發(fā)酵）、山梨醇、海藻糖、果糖，不發(fā)酵木糖、甘露醇、肌醇、阿拉伯糖、側(cè)金盞花醇、棉子糖、衛(wèi)矛醇和纖維二糖，不利用枸酸鹽，40%膽汁不溶解，吲哚、硫化氫、尿素、明膠液化、硝酸鹽還原、賴氨酸、鳥氨酸均陰性，VP、甲基紅試驗(yàn)和精氨酸水解陽(yáng)性。
抵抗力
該菌對(duì)物理化學(xué)因素抵抗力較強(qiáng)，在土壤、糞便、青儲(chǔ)飼料和干草內(nèi)能長(zhǎng)期存活，對(duì)堿和鹽抵抗力強(qiáng)，60-70℃經(jīng)5-20min可殺死，70%乙醇5min、2.5%苯酚、2.5%氫氧化鈉、2.5%甲醛水溶液20min可殺死此菌。該菌對(duì)芐青霉素、氨芐青霉素、四環(huán)素、磺胺均敏感。
流行病學(xué)
單增李斯特氏菌廣泛存在于自然界中，不易被凍融，能耐受較高的滲透壓，在土壤、地表水、污水、廢水、植物、青儲(chǔ)飼料、爛菜中均有該菌存在，所以動(dòng)物很容易食入該菌，并通過口腔-糞便的途徑進(jìn)行傳播。據(jù)報(bào)道，健康人糞便中單增李姓菌的攜帶率為0.6-16%,有70%的人可短期帶菌，4-8%的水產(chǎn)品、5-10%的奶及其產(chǎn)品、30%以上的肉制品及15%以上的家禽均被該菌污染。
該菌可通過眼及破損皮膚、粘膜進(jìn)入體內(nèi)而造成感染，孕婦感染后通過胎盤或產(chǎn)道感染胎兒或新生兒，棲居于陰道、子宮頸的該菌也引起感染，性接觸也是本病傳播的可能途徑，且有上升趨勢(shì)。
檢測(cè)方法
1.細(xì)菌培養(yǎng)法
該菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，兼性厭氧，最適在含有CO2的微需氧環(huán)境中生長(zhǎng)，生長(zhǎng)溫度范圍-1.5℃-45℃，最適溫度為30℃-37℃，能在普通冰箱冷藏室生長(zhǎng)，是一種典型的耐冷性細(xì)菌，同時(shí)還具有耐鹽性。LM在普通瓊脂平板上呈細(xì)小直徑約0.2-0.4μm、半透明露水樣菌落。在血瓊脂平板上有β溶血環(huán)。在顯色培養(yǎng)基上呈藍(lán)綠色。
食品中斯特菌的傳統(tǒng)檢驗(yàn)方法是進(jìn)行前增菌或選擇性增菌，以分離培養(yǎng)得到的可疑菌落做生化反應(yīng)實(shí)驗(yàn)、溶血性貧血實(shí)驗(yàn)、協(xié)同溶血實(shí)驗(yàn)（CAMP）等免疫學(xué)檢測(cè)，被確定為李斯特氏菌后進(jìn)一步進(jìn)行血清分型。該方法中增菌和選擇性增菌是不可缺少的步驟。增菌的方法主要包括：冷增菌法和常溫培養(yǎng)方法。冷增菌法是在4℃培養(yǎng)30d，有時(shí)甚至長(zhǎng)達(dá)一年。常溫增菌需培養(yǎng)24h至7d。故傳統(tǒng)檢測(cè)方法需要7-11d才能分離鑒定出李斯特氏菌，故傳統(tǒng)方法檢測(cè)周期較長(zhǎng)。
2.血清凝集法
根據(jù)菌體抗原和鞭毛抗原，LM分為16個(gè)血清型：1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4ab、4b、4c、4d、4e、5、6a、6b、7。抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，對(duì)人致病的主要為血清型1/2a、1/2b、4b，占全球本病病例約90%。
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3.分子生物學(xué)檢測(cè)方法
隨著核酸探針雜交技術(shù)的應(yīng)用，使對(duì)單核細(xì)胞增生性斯特菌的檢測(cè)進(jìn)入了分子水平。
3.1 探針檢測(cè)技術(shù)
這一技術(shù)是最早應(yīng)用于李斯特氏菌檢測(cè)的分子生物學(xué)技術(shù)。早在1988年，Atin等就克隆出李斯特氏菌β溶血素基因的一個(gè)500bpDNA片斷并測(cè)序，以此序列合成4種寡核苷酸探針。以32P標(biāo)記該探針，經(jīng)斑點(diǎn)雜交實(shí)驗(yàn)證實(shí)，該探針只與李斯特氏菌反應(yīng)，與其他種的李斯特氏菌和屬外的細(xì)菌均呈陰性，表現(xiàn)出很好的特異性。但探針雜交無(wú)法分辨死菌和活菌，盡管通過增菌可使死菌比例減少，相對(duì)地減少假陽(yáng)性，但并不能完全杜絕假陽(yáng)性結(jié)果。隨著探針技術(shù)的逐漸成熟，人們開始關(guān)注將多個(gè)脫氧核糖核酸特異性探針固定到芯片上，制成基因芯片?；蛐酒奶攸c(diǎn)是可同時(shí)檢測(cè)多種菌，可以減少實(shí)驗(yàn)次數(shù)，并且檢測(cè)所需的引物較少。
3.2聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（polymerasechainreaction，PCR）檢測(cè)技術(shù)
PCR的發(fā)展已經(jīng)相當(dāng)成熟，廣泛應(yīng)用于斯特菌的檢測(cè)。PCR擴(kuò)增特異性引物一種是依據(jù)李斯特氏菌的特異毒力基因序列而設(shè)計(jì)，一種是依據(jù)李斯特氏菌基因組中特異序列而設(shè)計(jì)。常用的靶序列為hlyA、iap、inl、Dth-18等毒力基因。利用PCR方法來檢測(cè)李斯特氏菌的優(yōu)點(diǎn)是方法的特異性好，不足之處是靈敏度較低；將樣品培養(yǎng)物經(jīng)化學(xué)抽提后再進(jìn)行擴(kuò)增，提高了樣品的檢出率；并且可以檢測(cè)到傳統(tǒng)增菌方法不能檢出的“活的非可培養(yǎng)”的李斯特氏菌。PCR技術(shù)還可對(duì)斯特菌進(jìn)行定量檢測(cè)。例如Nogva等運(yùn)用5′-核酸酶PCR對(duì)單增李斯特氏菌定量；Choia等運(yùn)用cPCR對(duì)李斯特氏菌進(jìn)行定量；Long等以hly為靶基因，采用PCRELISA聯(lián)合檢測(cè)技術(shù)。
致病性
單增李氏菌進(jìn)入人體后是否發(fā)病，與菌的毒力和宿主的年齡、免疫狀態(tài)有關(guān)，因?yàn)樵摼且环N細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主對(duì)它的清除主要靠細(xì)胞免疫功能。因此，易感者為新生兒、孕婦及40歲以上的成人，此外，酗酒者、免疫系統(tǒng)損傷或缺陷者、接受免疫抑制劑和皮質(zhì)激素治療的患者及器官移植者也易被該菌感染。該病的臨床表現(xiàn)，健康成人個(gè)體出現(xiàn)輕微類似流感癥狀，新生兒、孕婦、免疫缺陷病患者表現(xiàn)為呼吸急促、嘔吐、出血性皮疹、化膿性結(jié)膜炎、發(fā)熱、抽搐、昏迷、自然流產(chǎn)、腦膜炎、敗血癥直至死亡。
單增李氏菌的抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，它的致病性與毒力機(jī)理如下：
1、寄生物介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)增生，使它附著及進(jìn)入腸細(xì)胞與巨噬細(xì)胞；
2、抗活化的巨噬細(xì)胞，單增李氏菌有細(xì)菌性過氧化物歧化酶，使它能抗活化巨噬細(xì)胞內(nèi)的過氧物（為殺菌的毒性游離基團(tuán)）分解；
3、溶血素，即李姓桿菌素O，可以從培養(yǎng)物上清液中獲得，為SH活化的細(xì)胞溶素，有α和β兩種，為毒力因子。
傳播途徑
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌主要以食物為傳染媒介，是最致命的食源性病原體之一，造成二至三成的感染者死亡，其致死率甚至高過沙門氏菌及肉毒桿菌。人主要通過食入軟奶酪、未充分加熱的雞肉、未再次加熱的熱狗、鮮牛奶、巴氏消毒奶、朗姆冰糕、生牛排、羊排、卷心菜色拉、芹菜、西紅柿、法式餡餅、凍豬舌等而感染。約占85-90%的病例是由被污染的食品引起的。
該菌可通過眼及破損皮膚、黏膜進(jìn)人體內(nèi)而造成感染，孕婦感染后通過胎盤或產(chǎn)道感染胎兒或新生兒。棲居于陰道、子宮頸的該菌也可引起感染。性接觸也是本病傳播的可能途徑，且有上升趨勢(shì)。
風(fēng)險(xiǎn)控制措施
①單核細(xì)胞增生李斯特氏菌分離純化及保菌操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，若發(fā)生磁珠管破損、磁珠掉落時(shí)，應(yīng)立刻對(duì)所涉及的器物進(jìn)行消毒處理，并按《二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理》中“意外事故處理辦法章節(jié)規(guī)范”處置。
②單核細(xì)胞增生李斯特氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的使用、保存嚴(yán)格按照《菌（毒）種管理規(guī)程》（XJK/CX37）要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格實(shí)行雙人雙鎖保管，嚴(yán)防菌株被惡意使用而造成的生物危害。
③在單核細(xì)胞增生李斯特氏菌陽(yáng)性菌株在上送過程中嚴(yán)格執(zhí)行B類運(yùn)輸包裝（同“樣品采集”），攜帶“可感染人類的高致病性病原菌菌（毒）種或樣本運(yùn)輸許可證”，由專車運(yùn)送，由專業(yè)人員全程護(hù)送。
防治方案
預(yù)防
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競(jìng)爭(zhēng)性細(xì)菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競(jìng)爭(zhēng)的環(huán)境條件下易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達(dá)到70℃持續(xù)2min以上。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在自然界中廣泛存在，所以即使產(chǎn)品已經(jīng)過熱加工處理后充分滅活了單增李斯特氏菌，但有可能造成產(chǎn)品的二次污染，因此，蒸煮后防止二次污染是極為重要的。因?yàn)閱魏思?xì)胞增生李斯特氏菌在4℃下仍然能生長(zhǎng)繁殖，所以未加熱的冰箱食品增加了食物中毒的危險(xiǎn)。冰箱食品需加熱后再食用。如果是生魚片之類的海鮮，則專業(yè)酒店都會(huì)存放于零下40℃左右的大型冰柜，以確保殺滅寄生昆蟲及防止病菌感染。
治療
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌感染治療可用芐青霉素、氨芐西林、慶大霉素，紅霉素等。對(duì)青霉素過敏的可用紅霉素和其他廣譜抗生素。
來源
斯特菌是1926年英國(guó)南非裔科學(xué)家穆里在病死的兔子體內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的。為紀(jì)念近代消毒手術(shù)之父、英國(guó)生理學(xué)家約瑟夫·李斯特（1827-1912），1940年，在第三屆國(guó)際微生物學(xué)大會(huì)上將其命名為李斯特氏菌。
種類
國(guó)際上公認(rèn)的李斯特菌共有以下七個(gè)菌株：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌（Listeria monocytogenes）、綿羊李斯特菌（Listeria iuanuii）、英諾克李斯特菌（Listeria innocua）、威爾斯李斯特菌（Listeria welshimeri）。、西爾李斯特菌（Listeria seeligeri）、格雷李斯特菌（Listeria grayi）、默里李斯特菌（Listeria murrayi）。其中，單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是唯一能夠引起人類疾病的，它是一種人畜共患病的病原菌，中毒嚴(yán)重的可引起血液和腦組織感染。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌簡(jiǎn)稱單增李斯特氏菌，為革蘭陽(yáng)性菌，屬厚壁菌門。
細(xì)胞分型
根據(jù)菌體（O）抗原和鞭毛（H）抗原，將單增李斯特氏菌分成13個(gè)血清型，分別是1/2a、1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、4b、4ab、4c、4d、4e和“7”13個(gè)血清型。致病菌株的血清型一般為1/2b、1/2c、3a、3b、3c、4a、1/2a和4b，后兩型尤多。該菌與多種革蘭陽(yáng)性菌有共同抗原，故血清學(xué)診斷無(wú)意義。
本菌的抗原結(jié)構(gòu)與毒力無(wú)關(guān)，且本菌與葡萄球菌、鏈球菌、肺炎球菌等多數(shù)革蘭氏陽(yáng)性菌和大腸桿菌有共同抗原，故血清學(xué)診斷無(wú)意義。
變異性
對(duì)于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的變異性尚未有確鑿證據(jù)資料可以證實(shí)。
體征
直或稍彎，兩端鈍圓，常呈V字型排列，偶有球狀、雙球狀，兼性厭氧、無(wú)芽孢，一般不形成莢膜。
參考資料 >
單核細(xì)胞增生李斯特氏菌及檢驗(yàn).食品伙伴網(wǎng).2013-07-09