空腸彎曲菌(Campylobacter jejuni)是一種常見的病原菌,與鳥綱有密切關(guān)聯(lián),也是動(dòng)物糞便中的常見菌。它是全球人類細(xì)菌性腹瀉的主要原因之一,尤其在歐洲、美國(guó)等地,其感染率較高。空腸彎曲菌的感染通常表現(xiàn)為孤立事件,而非大規(guī)模爆發(fā)。通過主動(dòng)監(jiān)測(cè),美國(guó)每年約有20例每10萬人的感染病例,而實(shí)際感染人數(shù)可能遠(yuǎn)高于報(bào)告數(shù)字。在歐洲,2018年報(bào)告了246,571例病例,估計(jì)每年有約900萬例人類空腸彎曲菌感染。在非洲、亞洲和中東地區(qū),C. jejuni感染是地方性流行病。
簡(jiǎn)介
抗原構(gòu)造
本菌在普通培養(yǎng)基上難以生長(zhǎng),在凝固血清和血瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)36小時(shí)可見無色半透明毛玻璃樣小菌落,單個(gè)菌落呈中心凸起,周邊不規(guī)則,無溶血性貧血現(xiàn)象。空腸彎曲生化反應(yīng)不活潑,不發(fā)酵糖類,不分解尿素,基質(zhì)陰性。可還原硝酸鹽,氧化酶和過氧化氫酶為陽(yáng)性。能產(chǎn)生微量或不產(chǎn)生硫化氫,甲基紅和vp試驗(yàn)陰性,枸椽酸鹽培養(yǎng)基中不生長(zhǎng),在彎曲菌中唯一馬尿酸呈陽(yáng)性反應(yīng)。
抵抗力
空腸彎曲菌抵抗力不強(qiáng),易被干燥、直射日光及弱消毒劑所殺滅,56℃5分鐘可被殺死。對(duì)紅霉素、新霉素、慶大霉素、四環(huán)素、氯霉素、卡那霉素等抗生素敏感。近年發(fā)現(xiàn)了不少耐藥菌株,及多重耐藥性菌株。
空腸彎曲菌抗原構(gòu)造與腸道桿菌一樣具有o、h和k抗原。根據(jù)o抗原,可把空腸彎曲菌分成45個(gè)以上血清型,第11、12和18血清型最為常見。空腸彎曲菌是多種動(dòng)物如牛、羊、狗及鳥綱的正常寄居菌。在它們的生殖道或腸道有大量細(xì)菌,故可通過分娩或排泄物污染食物和飲水。人群普遍易感,5歲以下兒童的發(fā)病率最高,夏秋季多見。蒼蠅能起重要的媒介作用。亦可經(jīng)接觸感染。感染的產(chǎn)婦可在分娩時(shí)傳染給胎兒。
流行病學(xué)特點(diǎn)
空腸彎曲菌有內(nèi)毒素能侵襲小腸和大腸黏膜引起急性腸炎,亦可引起腹瀉的暴發(fā)流行或集體食物中毒。潛伏期一般為3~5天,對(duì)人的致病部位是空腸、回腸及放射性腸炎。主要癥狀為痙攣性腹痛、腹瀉、血便或果醬樣便,量多;頭痛、不適、發(fā)熱。細(xì)菌有時(shí)可通過腸黏膜入血流引起敗血癥和其他臟器感染,如腦膜炎、關(guān)節(jié)炎、腎盂腎炎等。孕婦感染本菌可導(dǎo)致流產(chǎn),早產(chǎn),而且可使新生兒受感染。感染后能產(chǎn)生特異性血清抗體,可增強(qiáng)吞噬細(xì)胞功能。目前尚未測(cè)得腸道局部slga抗體。空腸彎曲菌對(duì)多種抗生素敏感,常用紅霉素、四環(huán)素治療。
空腸彎曲菌是多種動(dòng)物(如牛、羊、狗及鳥綱)的正常寄居菌。在它們的生殖道或腸道有大量細(xì)菌,故可通過分娩或排泄物污染食物和飲水。健康人群帶菌率約1.2%-3.0%。
(1)中毒食品多為肉與肉制品、魚、牛奶、糕點(diǎn)等。
(2)中毒全年均可發(fā)生,夏秋季多見。
分布范圍
彎曲菌屬?gòu)V泛散布在各種動(dòng)物體內(nèi),是多種動(dòng)物如牛、羊、狗及禽類的正常寄居菌,在它們的生殖道或腸道有大量彎曲菌,其中以家禽、野禽和家畜帶菌最多,其次在嚙齒動(dòng)物體內(nèi)也分離出彎曲菌,可通過分娩或排泄物污染食物和飲水。
發(fā)病機(jī)制
空腸彎曲菌是一種人畜共患病病原菌,可以引起人和動(dòng)物發(fā)生多種疾病,并且是一種食物源性病原菌,被認(rèn)為是引起全世界人類細(xì)菌性腹瀉的主要原因,對(duì)空腸彎曲菌的致病機(jī)理的研究越來越多。其致病因素包括粘附、侵襲、產(chǎn)生毒素和分子模擬機(jī)制等四個(gè)方面,通過分子模擬機(jī)制可以引起最嚴(yán)重的并發(fā)癥一格林一巴利綜合征。空腸彎曲茵可以通過產(chǎn)生細(xì)胞緊張性腸毒素、細(xì)胞毒素和細(xì)胞致死性膨脹毒素而致病。
生物學(xué)特性
形態(tài)染色特性
革蘭氏陰性無芽孢桿菌,呈弧形、螺旋形或S形,大小約為1.5~5×0.2~0.5μm。有一根端鞭毛,長(zhǎng)度約為菌體的2~3倍。有莢膜。有動(dòng)力,新鮮培養(yǎng)物在相差或暗視野顯微鏡下可看到細(xì)菌呈跳躍或射標(biāo)樣運(yùn)動(dòng)。在陳舊培養(yǎng)物中或培養(yǎng)環(huán)境變堿時(shí)形態(tài)易變?yōu)榍蛐尾适?dòng)力。
培養(yǎng)特性
需微需氧環(huán)境才能生長(zhǎng),最適氣體條件是N2、CO2、O2含量比為85: 10:5。最適溫度42℃,最適pH為7.2。本菌對(duì)營(yíng)養(yǎng)要求較高,在一般的腸道菌分離培養(yǎng)基中不能生長(zhǎng),只有在含有血液、血清、營(yíng)養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上才能生長(zhǎng)良好,可見無色半透明毛玻璃樣小菌落,單個(gè)菌落呈中心凸起,周邊不規(guī)則,無溶血現(xiàn)象。在TTC培養(yǎng)基上菌苔呈紫色光澤。
生化特性
生化反應(yīng)不活潑。不發(fā)酵糖類;不液化明膠;MR和V-P試驗(yàn)均為陰性;氧化酶陽(yáng)性;觸酶陽(yáng)性;不產(chǎn)生硫化氫;脲酶陰性;在3.5%NaCl環(huán)境中不生長(zhǎng),1%甘氨酸中和馬尿酸鈉培養(yǎng)基中生長(zhǎng),煌綠(1: 10-5)中不生長(zhǎng);除個(gè)別菌株外,均無色素產(chǎn)生。
血清學(xué)特性
本菌抗原構(gòu)造與腸道桿菌一樣具有O、H和K抗原。根據(jù)O抗原,可把空腸彎曲菌分成45個(gè)以上血清型,第11、12和18血清型最為常見。
檢驗(yàn)
一)樣品的的收集與處理
二)常規(guī)檢驗(yàn)方法(GB/T 4789.9-2003)
1、微需氧條件的準(zhǔn)備?????? 2、分離與初步鑒定????? 3、確定鑒定
4、生物分型 :1)快速馬尿酸鈉水解試驗(yàn);2)快速硫化氫試驗(yàn);3)脫氧核糖核酸酶水解試驗(yàn)。
5、血清學(xué)鑒定:1)間接血凝分型法;2)Lior玻片凝集法。
三)其它檢驗(yàn)方法
1、微需氧條件的準(zhǔn)備?????? 換氣法?? ?氣袋法??? 燭缸法 ??雙平板法
2、分離與初步鑒定???? 分離:改良Camp-BAP,Skirrow氏培養(yǎng)基。
第一型菌落:不溶血性貧血,灰色、扁平、濕潤(rùn)、有光澤,露滴狀,有沿接種線擴(kuò)散的傾向。
第二型菌落:不溶血,常呈分散凸起的單個(gè)菌落(1mm~2mm),邊緣完整、發(fā)亮。
初步鑒定:? 氧化酶陽(yáng)性,觸酶陽(yáng)性???????? Gram’s染色???????? 暗視野或相差顯微鏡觀察動(dòng)力
3、確定鑒定
甘氨酸耐受性試驗(yàn):生長(zhǎng),+ ;? 硫化氫試驗(yàn):- ;? 3.5%NaCl耐受性 :-;? 42℃和25 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn):42℃+,25 ℃-;
馬尿酸鈉水解試驗(yàn) :+;? 萘啶酸試驗(yàn) :敏感;?? TTC試驗(yàn) :紫色菌苔;???? 硝酸鹽還原試驗(yàn) :+
4、生物分型
空腸彎曲菌生物型
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預(yù)防措施
(1)與動(dòng)物或生的動(dòng)物制品接觸后要及時(shí)洗手。
(2)貯存動(dòng)物性食品時(shí)要注意衛(wèi)生,防止生熟交叉污染。
(3)肉類食品要注意烹調(diào)方法,燒熟、煮透。牛奶要加熱消毒后食用。
(4)養(yǎng)成良好的個(gè)人衛(wèi)生習(xí)慣。
空腸彎曲桿菌的保藏
(1)短期保藏
1)接種于裝有10ml酸水解酪素酵母浸膏氯化鈉肉湯的試管中。 配制方法:20g酸水解酪素,6g酵母浸膏,2.5g氯化鈉和8.17g碘化鈉酸氫二鉀,補(bǔ)足蒸餾水至1L。121℃,15min滅菌。調(diào)整pH,使其在滅菌后為8.5±0.2。 2)將接種過的培養(yǎng)基在41℃?44℃培養(yǎng)48h±2h。 3)在蛋白巧克力瓊脂或血瓊脂斜面上進(jìn)行劃線,41℃?44℃培養(yǎng)48±2h。 4)每周進(jìn)行傳代。 (2)長(zhǎng)期保藏
1)接種于裝有10ml酸水解酪素-酵母浸膏-氯化鈉肉湯的試管中,于41℃?44℃培養(yǎng)48±2h。
2)在培養(yǎng)物內(nèi)加入丙三醇,使最終濃度達(dá)到10%~20%。 3〕分裝2ml?3ml,于-70℃或更低溫度進(jìn)行冷凍。 4)每6個(gè)月傳代一次。
空腸彎曲菌形態(tài)
革蘭陰性彎曲小桿菌,多種形態(tài),有螺旋形、彎曲桿狀、S形、逗點(diǎn)狀、飛翔的普通海鷗形,陳舊培養(yǎng)物中可變成球形。無芽孢、無莢膜,有鞭毛,運(yùn)動(dòng)活潑,似飛箭樣、穿梭樣翻滾運(yùn)動(dòng)。 ? ? ?
微需氧:5%氧氣、10%二氧化碳、85%氮?dú)?/a>;
最適生長(zhǎng)溫度:42~43℃;
營(yíng)養(yǎng)要求高,含血液和血清的培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好,液體培養(yǎng)基混濁生長(zhǎng)。 ? ? ?
不酵解不氧化碳水化合物;
氧化酶、觸酶陽(yáng)性;
菌體抗原(O)抗原:可分成45個(gè)以上血清型,第11、12和18血清型最為常見 ;
鞭毛抗原(H)抗原;
包膜抗原(K)抗原。 ? ? ?
不強(qiáng),直射陽(yáng)光、干燥可殺滅;
60℃ 5min ?滅活;
紫外線照射5min可滅活;
一般消毒劑均可殺滅。 ? ?
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空腸彎曲菌的鑒定
5.4 鑒定 5.4.1 彎曲菌屬的鑒定 5.4.1.1 概述 挑取5個(gè)(如少于5個(gè)則全部挑取)或更多的可疑菌落接種到哥倫比亞血瓊脂平板上,微需氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)24 h~48 h,按照5.4.1.1~5.4.1.5進(jìn)行鑒定,結(jié)果符合表1的可疑菌落確定為彎曲菌屬。
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5.4.1.2 形態(tài)觀察 挑取可疑菌落進(jìn)行革蘭氏染色,鏡檢。 5.4.1.3 動(dòng)力觀察 挑取可疑菌落用1mL 布氏肉湯懸浮,用相差顯微鏡觀察運(yùn)動(dòng)狀態(tài)。 5.4.1.4 氧化酶試驗(yàn) 用鉑/銥接種環(huán)或玻璃棒挑取可疑菌落至氧化酶試劑潤(rùn)濕的濾紙上,如果在10s內(nèi)出現(xiàn)紫紅色、紫羅蘭或深藍(lán)色為陽(yáng)性。 5.4.1.5 微需氧條件下25 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn) 挑取可疑菌落,接種到哥倫比亞血瓊脂平板上,微需氧條件下25 ℃±1 ℃培養(yǎng)44 h±4 h,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。 5.4.1.6 有氧條件下42 ℃±1 ℃生長(zhǎng)試驗(yàn) 挑取可疑菌落,接種到哥倫比亞血瓊脂平板上,有氧條件下42 ℃±1 ℃培養(yǎng)44 h±4 h,觀察細(xì)菌生長(zhǎng)情況。 5.4.2 空腸彎曲菌的鑒定 5.4.2.1 過氧化氫酶試驗(yàn)
挑取菌落,加到干凈玻片上的3%過氧化氫中,如果在30s內(nèi)出現(xiàn)氣泡則判定結(jié)果為陽(yáng)性。 5.4.2.2 馬尿酸鈉水解試驗(yàn) 挑取菌落,加到盛有0.4 mL 1%馬尿酸鈉的試管中制成菌懸液。混合均勻后在36 ℃±1 ℃水浴中溫育2 h或36 ℃±1 ℃培養(yǎng)箱中溫育4 h。沿著試管壁緩緩加入0.2 mL茚三酮溶液,不要振蕩,在36 ℃±1 ℃的水浴或培養(yǎng)箱中再溫育10 min后判讀結(jié)果。若出現(xiàn)深紫色則為陽(yáng)性;若出現(xiàn)淡紫色或沒有顏色變化則為陰性。 5.4.2.3 吲哚乙酸酯水解試驗(yàn) 挑取菌落至吲哚乙酸酯紙片上,再滴加一滴滅菌水。如果吲哚乙酸酯水解,則在5 min~10 min內(nèi)出現(xiàn)深藍(lán)色;若無顏色變化則表示沒有發(fā)生水解。空腸彎曲菌的鑒定結(jié)果見表2。
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治療方法
(1)本菌對(duì)紅霉素、慶大霉素、卡那霉素、氯霉素、新霉素敏感,對(duì)利福平、青霉素類不敏感。
(2)對(duì)癥治療。
參考資料 >
空腸彎曲菌.空腸彎曲菌.2024-09-21
空腸彎曲菌及其檢驗(yàn).空腸彎曲菌及其檢驗(yàn).2024-09-21
空腸彎曲桿菌的保藏.空腸彎曲桿菌的保藏.2024-09-21
空腸彎曲菌形態(tài).空腸彎曲菌形態(tài).2024-09-21
空腸彎曲菌的鑒定-GB4789.9-2014.空腸彎曲菌的鑒定-GB4789.9-2014.2024-09-21