鱟試劑是由海洋節肢動物門鱟的血液變形細胞溶解物制成的無菌低溫冷凍干燥品，含有能被微量細菌內毒素和真菌葡聚糖激活的凝固酶原，凝固蛋白原。鱟試劑廣泛用于制藥、臨床以及科研等領域，專用于細菌內毒素檢測和真菌（1,3）-β-D-葡聚糖檢測。使用的鱟試劑分為美洲鱟試劑和中國鱟鱟試劑兩大類。
鱟試劑簡介
鱟的身上流淌著一種十分珍奇的血液。這種血液是淡藍色的。這種淡藍色的血液中含銅量很高，而且一遇到細菌就會凝固。利用鱟血液的這種特殊反應，對它進行處理，可以制成一種特殊的檢驗試劑——“鱟試劑”。鱟試劑可以準確、快速地檢測人體內部組織是否因細菌感染而致??；在制藥和食品工業中，也可用它對毒素污染進行監測。鱟試驗的研究可以追溯到十九世紀八十年代左右，但是在1956年美國的約翰·霍普金斯大學動物學F.Bang的一篇論文《鱟的一種細菌性疾病》發表后，人們才發現了鱟血液的實際醫用價值。1965年，Dr.Bang與他的合作者制備了沒有血液的鱟血細胞溶解物(LAL)，1968年便正式命名為鱟試驗(Limulus Test)。鱟試劑主要成分是鱟血細胞溶解物經三氯甲烷處理去除了抗脂多糖因子，并加入適量二價鈣、鎂離子，含有C、B、G因子。因此，科學家認為血液呈淡藍色的鱟在醫學研究中有獨特作用。用鱟血制成試劑，再滴入注射液，若試劑立即凝固或變色，就說明注射液內含有使人發熱、休克甚至死亡的細菌內毒素。此外，鱟為國家二級保護動物，我們呼吁政府和民間共同加強該“活化石”生物的保護。
試劑分類
按實驗方法分
細菌內毒素檢查法包括兩種方法，即凝膠法和光度測定法，后者又包括濁度法和顯色基質法。則鱟試劑可分為：凝膠法鱟試劑、動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑。凝膠法鱟試劑通過與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑和終點顯色法鱟試劑則都是定量檢測內毒素的。
按使用特點分
普通鱟試劑 靈敏度0.5～0.125EU/ml，適用于僅需要檢測內毒素限量的樣品。高靈敏度鱟試劑 靈敏度0.06～0.015 EU/ml，適用于內毒素限量較低的樣品細菌內毒素檢查。特異性鱟試劑 靈敏度0.5～0.015EU/ml，適用于成分較為復雜，會對鱟試劑產生干擾的樣品。定量法鱟試劑 最低檢測限0.03～0.005 EU/ml，適用于需要對內毒素進行定量測定的樣品。
實驗方法
鱟試劑按實驗方法可分為：凝膠法、動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑。凝膠法系通過鱟試劑與內毒素產生凝集反應的原理來定性檢測或半定量內毒素的方法。凝膠法是通過觀察有無凝膠形成作為反應的終點。此法操作比較簡單，經濟，不需要專用測定設備，可以進行定性或半定量測定。凝膠法鱟試劑常見規格為0.1ml/支或0.2ml/支的單個測試或0.5ml/支至5.2ml/瓶的真空封口西林瓶裝的多個測試。使用時一般應加細菌內毒素檢查用水復溶后使用。特異性鱟試劑，即棄G因子鱟試劑，是廈門市鱟試劑實驗廠有限公司國內首創的產品，它專一對內毒素起反應，避免了G因子旁路的干擾，使檢測結果更加可靠，在藥檢和臨床檢驗方面是不可或缺的理想檢測試劑。動態濁度法鱟試劑、終點濁度法鱟試劑、動態顯色法鱟試劑、終點顯色法鱟試劑，這四種方法都是定量檢測內毒素的。這幾種定量法鱟試劑統稱光度法鱟試劑。根據檢測原理，終點濁度法和動態濁度法都屬于濁度法。濁度法系利用檢測鱟試劑與內毒素反應過程中的濁度變化而測定內毒素含量的方法。終點濁度法未見商品化產品。動態濁度法（又稱動態比濁法）是檢測反應混合物的濁度上升某一預先設定的吸光度所需要的反應時間，或是檢測濁度增加速度的方法。
動態濁度法的特點為：1. 能準確定量。2.檢測范圍寬，可達4個數量級。3.靈敏度高達0.005EU/ml。4. 操作簡便，系統自動檢測分析，一步即成。5. 經濟實用，試劑樣品需要量少，可降至50μL。6. 和微生物檢測系統Elx808（配套IU）及專用軟件TALgent使用，一次可同時檢測多達96個樣品。終點顯色法和動態顯色法都是屬于顯色基質法。顯色基質法系利用鱟試劑與內毒素反應過程中產生的凝固酶使特定底物顯色釋放出的呈色團的多少而測定內毒素含量的方法，根據產物顏色判斷內毒素濃度，又稱為比色法。顯色基質法由于不依賴凝固蛋白形成凝膠，抗干擾能力強，特別適用于生物制品（蛋白、新型冠狀病毒疫苗等）和臨床樣品（黃疸、血液、尿液）的細菌內毒素檢測。終點顯色法是反應時間最短的鱟試驗法，只需要16分鐘就能得出結果。而且可以偶氮化染色劑，避開某些有色檢品自身顏色對鱟試驗的干擾。終點顯色法不需要特殊的檢測儀器就能準確定量。動態顯色法鱟試劑兼有動態濁度法和終點顯色法鱟試劑的優點，抗干擾能力強，使用簡單方便，檢測范圍寬，靈敏度高達0.005EU/ml, 是世界上最好的鱟試劑。但是價格較高。如果您僅需要檢測樣品的內毒素限量，可以選擇凝膠法鱟試劑，通過確定內毒素限值及最大有效稀釋倍數，做樣品的干擾試驗從而確定使用的鱟試劑的靈敏度。如果您需要定量測定樣品中內毒素含量則應選擇顯色基質鱟試劑盒或動態濁度法鱟試劑。日常檢測量不大時，可以選擇終點顯色法鱟試劑，用普通的分光光度計就可完成實驗。如果您檢測的樣品是生物制品、新型冠狀病毒疫苗、血液制品等最好選用終點顯色法鱟試劑或動態顯色法鱟試劑。如果您日常的檢測量比較大，檢測的樣品對鱟試劑的干擾不大，可選用動態濁度法鱟試劑。動態濁度法鱟試劑特別適用于制藥企業對產品生產過程中的內毒素水平的監控。動態濁度法與動態顯色法需要帶溫育系統的動態光度測定儀器及配套軟件。微生物檢測系統El808（配套IU）適用于所有的定量法鱟試驗。
正確使用
內毒素檢查法結果準確與否與所用鱟試劑的靈敏度相關性很大，而鱟試劑的靈敏度與它的正確使用又密切相關。所以，一定要嚴格執行鱟試劑的質量標準，規范使用鱟試劑。保證所使用鱟試劑的質量鱟試劑的質量主要表現于其靈敏度、自凝時間與成膠狀態三個方面：靈敏度穩定；自凝時間不低于24h；具有一定的緩沖能力與合適的pH；反應后即形成堅實凝膠，將成膠安瓿翻轉180°而不會被破壞。而質量稍差的鱟試劑存放一定時間后(如半年)其靈敏度可能發生變化，而靈敏度的改變會使測定結果所反映的供試品中內毒素的允許限值發生變化。因此，需選擇具有國家頒發的批準文號,質量穩定的鱟試劑。對鱟試劑靈敏度進行監測性復核由于不同廠家鱟試劑質量不盡相同，即便是相同廠家不同批號的鱟試劑也有差異,這便導致鱟試劑靈敏度復核值與標示值不盡一致，因此鱟試劑的復核值對檢測結果有顯著影響。每使用新批號鱟試劑時應復核其靈敏度；對留樣鱟試劑自生產之日起，每6個月進行一次靈敏度檢測，其靈敏度在有效期內應符合規定。有研究表明，鱟試劑的靈敏度在符合標準規定及適當的貯存條件下,3年內其靈敏度變化不大，是穩定的。建議可適當延長其有效期。因此，對鱟試劑靈敏度進行監測性復核有利于確保實驗的準確性，同時可以最大程度地使用鱟試劑。使用過程正確操作選擇合適的操作方法與順序，在鱟試劑的使用過程中尤為重要。在操作過程中要注意以下幾點：(1)實驗室要求潔凈、無塵埃流通；檢驗人員同時注意衛生的保持。在整個使用操作過程中應防止微生物的污染，例如空氣的流動，人員的口沫、汗液污染等。(2)鱟試劑開啟、溶解和配制時應盡量避免將安瓿外瓶壁臟物、瓶壁碎片、砂輪鋸屑等異物混入鱟試劑中，避免鱟試劑外損。(3)鱟試劑中含有多種蛋白質，用力振搖會產生氣泡，一旦起泡難以消除，而影響檢測的準確性，所以在整個操作過程中都要輕力以避免因過分震動而引起的誤差。(4)量取和加樣反應物時，一定要加到試管底部接近鱟試液而不接觸鱟試液的管壁處。(5)生成凝膠的最適pH值為6～8，對于氯化鈉注射液、葡萄糖注射液(5%,10%)等注射液，不需考慮供試液的pH值，而檢查其他制劑時，尤其是一些本身緩沖能力較強或偏酸、堿的供試品，應考慮供試品的pH值。(6)使用時要嚴格控制溫度和時間。當鱟試劑一加入內毒素及樣品混合液中時反應已開始，并在一定的溫度范圍內，反應溫度越高，反應速率越大；保溫時間的增長，也會提高鱟試劑的靈敏度，增加假陽性的發生，導致較大誤差。因此，要注意控制溫度的變化和保溫時間。(7)保持實驗器具的潔凈。每次檢驗完畢，應及時將玻璃器具充分清洗后于250℃干熱滅菌處理，待烤箱溫度升至設定的溫度后開始計時，干烤至少1h。也可用其他經確證不干擾細菌內毒素的檢查的適宜方法。對于塑料、橡膠等不耐熱器材可用30%過氧化氫浸泡4h，用無熱原水沖洗，70℃干燥備用。鱟試劑的貯存雖然凍干的鱟試劑在常溫條件下是相對穩定的，但還是應存放在2℃～8℃下，避免長時間放置在高于25℃的溫度條件下導致因貯藏不當、質量下降而引起的檢驗誤差。
參考資料 >
鱟的血液.中國數字科技館.2024-09-23
拱北口岸截獲一批違規出境美洲鱟試劑.中國質量新聞網.2024-09-23
影響鱟試劑靈敏度測定結果因素的分析.丁香通.2024-09-23