凝固蛋白原是一種化學(xué)物質(zhì)。
正文
亞洲血細(xì)胞溶解物先經(jīng)CM-SepharoseCL-6B分級(jí)洗脫,再經(jīng)Dextran-SepharoseCL-6B親和層析純化凝固蛋白原。用此法純化的凝固蛋白原免疫家兔產(chǎn)生抗血清，并用火箭免疫電泳法測(cè)定鱟血細(xì)胞溶解物與內(nèi)毒素反應(yīng)后的凝固蛋白原殘余量,根據(jù)殘余凝固蛋白原量與參加反應(yīng)內(nèi)毒素量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，建立了定量測(cè)定內(nèi)毒素的火箭免疫電泳鱟試驗(yàn)法。
介紹
第一類方法是一種功能測(cè)定法，所形成的纖維蛋白，又可再分為測(cè)重法，酚試劑比色法和紫外光度法、測(cè)氮法、濁度法和凝血酶凝固時(shí)間法等。這類方法的優(yōu)點(diǎn)是測(cè)定的是有凝血功能的纖維蛋白原，又稱為可凝固蛋白（clottableprotein），故特異性較好。方法可簡(jiǎn)可繁，常規(guī)使用中，多采用較簡(jiǎn)便的VonClauss法。根據(jù)這種方法設(shè)計(jì)的商品藥盒（kit），已在一些國家廣泛使用。據(jù)1975年美國CAP的調(diào)查，1939個(gè)臨床化驗(yàn)室中，用此法者占1824家，即94%用了本法，其中Tan等采用了速率法。這類方法中由Ratnoff和Menzzie改良的酚試劑比色法，其曾被提出作為參考方法。近幾年來，不少文獻(xiàn)推薦用Jocobsson的改良法作為纖維蛋白原標(biāo)準(zhǔn)的定值方法。這類方法的缺點(diǎn)是，從理論上講，有兩方面可引起誤差。一是所析出并測(cè)定的是纖維蛋白而非纖維蛋白原。已知纖維蛋白原變成纖維蛋白時(shí)會(huì)從α和β肽鏈上分別切下兩個(gè)短肽，即A肽（FpA）和B肽(FpB)。這樣纖維蛋白實(shí)際上比纖維蛋白原的質(zhì)量少了10%。二是已知纖維蛋白旦形成，就會(huì)吸附一些凝血因子或纖溶因子，這樣又會(huì)增加所測(cè)纖維蛋白原的量。此外，本法在操作中在獲取纖維蛋白和洗滌（擠壓）除去其它蛋白成份時(shí)，不僅比較麻煩而且也難以完全徹底，會(huì)造成其它蛋白污染。
第二類方法（物理化學(xué)測(cè)定法）在我國應(yīng)用最廣。這類方法又可分為鹽析法（包括用亞硫酸鈉、硫酸銨或氯化鈉鹽析，用蛋白質(zhì)顯色或比濁法測(cè)定），熱變性沉淀法和電泳法等幾種。這類方法都比較簡(jiǎn)單、快速，尤其適于急診檢驗(yàn)，但缺點(diǎn)是本法的特異性不強(qiáng)。所測(cè)的不是有凝固功能的纖維蛋白原，可能包括部分的降解產(chǎn)物和/或其它蛋白。而電泳法又太繁瑣，不適于常規(guī)工作。
第三類方法（免疫學(xué)方法），是將純纖維蛋白原作為抗原免疫動(dòng)物，制成多克隆或單克隆抗體。然后用免疫膠乳、被動(dòng)血凝或反向血凝、單向免疫擴(kuò)散、火箭電泳以及ELISA等方法測(cè)定。優(yōu)點(diǎn)是大部分方法簡(jiǎn)便，但缺點(diǎn)是所測(cè)的不僅是可凝固的纖維蛋白原，可能包括了它的降解產(chǎn)物（因?yàn)樗鼈冇泄餐乖部赡馨苏系K性纖維蛋白原（dysfibrinogens即N端谷氨酸γ位未羧化的無功能的纖維蛋白原，又稱缺維生素k引起的蛋白質(zhì)，PIVKA）。但免疫法也有一個(gè)好處，就是可用來測(cè)定PIVKA。如果一個(gè)患者總纖維蛋白原（用免疫學(xué)測(cè)定結(jié)果）不低，甚至增高，而功能性（即可凝固性）纖維蛋白原卻明顯減少，即可判斷為存在PIVKA。肝病、維生素K缺乏等均可導(dǎo)致PIVKA升高，有臨床診斷價(jià)值。總的說來，免疫學(xué)方法用于臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室仍存在一定問題。
結(jié)論
國內(nèi)引進(jìn)很多自動(dòng)血凝分析儀，這些儀器在測(cè)PT時(shí)往往同時(shí)報(bào)告纖維蛋白原。其原理和理論根據(jù)是：當(dāng)PT測(cè)定完成時(shí)，全部纖維蛋白原均變成纖維蛋白（相當(dāng)于Clauss法血漿中加入了凝血酶），其形成的濁度與纖維蛋白的含量成正比。因此，不需另加任何試劑，即可由濁度直接推算出纖維蛋白原的含量。故本法又稱為PT導(dǎo)出（或衍生）纖維蛋白原測(cè)定法，簡(jiǎn)稱PT-Der法。關(guān)于本法的可靠性，國外不少研究者已作過比較，總的情況是：此法精密度相當(dāng)高，當(dāng)血漿纖維蛋白原含量在正常范圍時(shí)，PT-Der法與經(jīng)典的Clauss法無顯著差異或略高于Clauss法；但當(dāng)纖維蛋白原減低時(shí)，PT-Der法往往偏高（p<0.001）,故此法用于纖維蛋白原含量減低者應(yīng)慎重。國內(nèi)目前采用此法者已愈來愈多。由于不斷有文獻(xiàn)報(bào)道，血漿纖維蛋白原水平的變化不僅與凝血障礙、出血、DIC、應(yīng)激（因?yàn)樗彩且环N急性期蛋白）有關(guān)，而且與心肌缺血，心肌梗死有關(guān)，因此臨床上倍受重視。不僅工作量增大而且對(duì)方法準(zhǔn)確性的要求也越來越高。但至今WHO、ICSH和NCCLS仍未明確提出一個(gè)纖維蛋白原的標(biāo)準(zhǔn)化或推薦方法，供臨床常規(guī)使用。但作為方法標(biāo)準(zhǔn)化的第一步，纖維蛋白的標(biāo)準(zhǔn)已經(jīng)有國際參考制品；另外用于標(biāo)準(zhǔn)品的標(biāo)化也有一個(gè)推薦方法。以下重點(diǎn)介紹這兩個(gè)方面。
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