脫氧核糖核三磷酸發明涉及人工合成脫氧核糖核酸的必備前體原料的制備方法。
基本介紹
申請專利號：CN00100844.7
專利申請日：2000.02.17
名稱：脫氧核糖核苷三磷酸的制備方法
公開（公告）號：CN1269422
公開（公告）日：2000.10.11
類別：化學；冶金
頒證日
優先權
申請（專利權）：郭煥芳
地址：102413北京市275信箱92分箱
發明（設計）人：郭煥芳
國際申請：
國際公布：
進入國家日期：
專利代理機構：北京市科技專利事務所
代理人：杜澄心
摘要
本發明涉及人工合成脫氧核糖核酸的必備前體原料的制備方法。本發明采用酶解—酶促—化學合成全新工藝。采用天然DNA經溶液態脫氧核糖核酸酶的酶解可得到DNMP，DNMP收率為70—90%。DNMP在經DNMP酶反應一步后結合化學反應，可分別轉化為相應的DNTP，經層析法純化，以鈉鹽或鋇鹽的形式沉淀分離，可以得到純度為95%—97%的DNTP。本發明不僅使DNTP的生產工藝變的簡單，而且使生產量達到了摩爾級，適于工業生產，并且污染性極小。
主權項
權利要求書1．一種脫氧核糖核苷三磷酸的制備方法，包括以下步驟：（1）酶解：DNMP酶制備的培養基的基本組成和含量為5——10%的細菌培養用酵母提取物、0．5—2%的蛋白胨、4—6%的磷酸氫二鉀、2—5%的磷酸氫二鉀、10—15%的葡萄糖、0.5—3%的尿素、0.2%的氯化鈣、0.2%的氯化鋅，余量為水溶液；以上培養基經滅菌、接種、收集和萃取直接獲得；萃取液不經純化可直接使用；將商品脫氧核糖核酸分散在水中制得DNA水溶液，在所述DNA溶液中加入鋅離子使其濃度達到2×10—2—1×10—4M，根據脫氧核糖核酸酶的活性加入其量，酶解在30—55℃下進行；酶解5—15小時；（2）酶促：DNMP水溶液用10M的氫氧化鉀溶液調節PH為4—8，加入磷酸鹽，再加入金屬離子，用ATP作催化劑，根據DNMP酶的活性加入DNMP酶，50—55℃保溫48—96小時；（3）化學合成：酶促反應完成后，加入等量的醇類溶劑，2—5倍量的磷酸或磷酸鹽，20—40倍量的DCC，80—90℃下反應4—8小時；所得混合液為磷酸鹽，DNMP、DNDP、DNTP和多磷化合物；該溶液經過層析分離可得到純凈的DNTP。
外顯子松果腺分子雜交
參考資料 >