己糖激酶是己糖的磷酸化酶，催化使葡萄糖從穩(wěn)定狀態(tài)變?yōu)榛钴S狀態(tài)，活化一個(gè)葡萄糖需要消耗1個(gè)atp，一個(gè)ATP放出一個(gè)高能磷酸鍵，大約放出30.5kj自由能，大部分變?yōu)闊崃慷⑹В〔糠质沽姿崤c葡萄糖結(jié)合生成葡萄糖-6-磷酸。
在己糖激酶催化下，葡萄糖和ATP發(fā)生磷酸化反應(yīng)，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與ADP。前者在葡糖-6-磷酸脫氫酶(G---6-PD)催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)，同時(shí)使NADP還原成NADPH。反應(yīng)式如下：
根據(jù)反應(yīng)方程式，NADPH的生成速率與葡萄糖濃度呈正比，在波長(zhǎng)340nm監(jiān)測(cè)吸光度升高速率，計(jì)算血清中葡萄糖濃度。
簡(jiǎn)介
在己糖激酶催化下，葡萄糖和三磷腺(腺苷 triplcosphate，atp)發(fā)生磷酸化反應(yīng)，生成葡萄糖-6-磷酸(G-6-P)與5'-二磷酸腺苷(adenosine driplcosphate，ADP)。前者在葡糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)催化下脫氫，生成6-磷酸葡萄糖酸(6-GP)，同時(shí)使氧化型輔酶Ⅰ(NADP)還原成還原型輔酶Ⅰ(NADPH)反應(yīng)式如下：
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根據(jù)反應(yīng)方程式，NADPH的生成速率與葡萄糖濃度呈正比，NADPH在340 nm有特異吸收峰，在波長(zhǎng)340 nm處監(jiān)測(cè)吸光度升高速率，計(jì)算血清中葡萄糖濃度。
過(guò)程
酶餛合試劑的成分與濃度
根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū)復(fù)溶后，混合配制成酶試劑，置褐色瓶中放冰箱保存，約可穩(wěn)定7天。
2．5mmol/L葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用液
手工操作
1．速率法測(cè)定(以半自動(dòng)步槍分析儀為例)
(1)主要參數(shù) (2)加樣；預(yù)溫酶混合試劑1000μ1，加血清20μ1，立即吸入自動(dòng)分析儀，監(jiān)測(cè)吸光度升高速率(△A/min)。
(3)計(jì)算
2．終點(diǎn)法測(cè)定：取試管，按下表編號(hào)進(jìn)行操作。
以上各管充分混勻，在水浴，準(zhǔn)確放置10min，分光光度計(jì)波長(zhǎng)340nm、比色杯光徑10mm，用蒸餾水調(diào)零，分別讀取各管吸光度(Au、Ac、As、AB)。
計(jì) 算
參考值
空腹血清葡萄糖為3.89—6.1lmmol/L(70一110mg/dl)。
附注
1．己糖激酶方法的特異性比葡萄糖氧化酶法高，是目前公認(rèn)為測(cè)定血糖的參考方法，適用于自動(dòng)分析儀。輕度溶血性貧血、脂血、黃、維生素c、氟化鈉、肝京、乙二胺四乙酸二鈉和草酸鹽等不干擾本法測(cè)定．因?yàn)閺募t細(xì)胞釋放出的有機(jī)磷酸酯和一些酶能消耗NADP，故干擾本法測(cè)定。
2．雖然根據(jù)NADPH的摩爾吸光度可以直接計(jì)算血清葡萄糖濃度(如Boehringer、Roche等試劑盒)，但建議最好同時(shí)測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)管和空白管(蒸餾水代替血清)。此時(shí)計(jì)算公式應(yīng)為：
參考資料 >