酶聯(lián)免疫測定（Enzyme-Linked Immunoassay, EIA）是一種常用的生物分析技術(shù)，它以酶作為標(biāo)記物，具有特異性、靈敏度、簡易性和快速等特點，在生物醫(yī)學(xué)研究和臨床疾病診斷中廣泛應(yīng)用。
技術(shù)特點
EIA技術(shù)相較于放射免疫測定（Radioimmunoassay, RIA），具有試劑半衰期長、環(huán)境友好以及廢棄物易處理的優(yōu)勢。然而，EIA的檢測靈敏度通常低于RIA。為了提升EIA的檢測靈敏度，研究人員開發(fā)了多種EIA測定放大系統(tǒng)，使得EIA的靈敏度能夠媲美甚至超過RIA。
放大原理
EIA的技術(shù)核心在于利用酶作為標(biāo)記物，因此，EIA的放大策略主要集中在標(biāo)記酶的增強方面。主要有以下三種途徑：
1. 增加標(biāo)記酶的數(shù)量
通過生物素/親和素-酶或酶/抗酶復(fù)合物的間接方法，可以在ELISA測定過程中顯著增加最終測量的標(biāo)記酶數(shù)量。盡管這種方法能在一定程度上提高EIA的靈敏度，但也可能導(dǎo)致非特異性背景顯色的增加。
2. 應(yīng)用非顯色底物
采用具有高靈敏度的非顯色底物，如熒光素或發(fā)光物質(zhì)，能有效提高EIA的靈敏度。這種方法無需額外的步驟和試劑制備，但需要特定的檢測儀器。
3. 添加受標(biāo)記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)
通過添加受標(biāo)記酶催化的反應(yīng)系統(tǒng)，如酶底物反應(yīng)循環(huán)或酶級聯(lián)反應(yīng)，實現(xiàn)反應(yīng)的放大。這些多步催化反應(yīng)的耦合構(gòu)成了酶放大的基礎(chǔ)，提高了靈敏度，而非簡單的分子轉(zhuǎn)化。選擇合適的酶放大系統(tǒng)時，除考慮生化因素外，還應(yīng)注重酶及其底物的穩(wěn)定性和易得性，這對實驗的準(zhǔn)確性與重復(fù)性至關(guān)重要。
參考資料 >
酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA種類和應(yīng)用.百度.2024-11-25
酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)的原理、操作及注意事項.微信公眾平臺.2024-11-25
酶聯(lián)免疫吸附試驗可以測什么.百度.2024-11-25